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點擊次數：15271 發布時間：2013/3/19 10:50:26
1. 實驗類型
ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cell ELISA和酶聯免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cell ELISA需要將微孔板中培養的細胞進行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養細胞，然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點。此外，我們還需要根據自身需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA實驗。
2. 抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實際上有時候二者結合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發生了沖突，就會對實驗結果產生較大影響。要避免這一問題，我們可以選擇購買“matched pair”的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經過驗證才推薦的好組合
3. 交叉反應
如果抗體間發生沖突或交叉反應就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個因素。盡管現在購買源自指定動物的抗體越來越容易，我們仍有必要確認一下是否會產生交叉反應的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應。如果檢測用二抗與捕獲抗體結合，實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。
4. 檢測方式
如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據自己的偏好進行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應的可溶性產物，抗體上結合有相應的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP），而反應體系中添加有相應的底物（如3，3-二氨基聯苯胺DAB）。這種酶促反應生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結合在一抗上，也可以結合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合。此外ELISA的結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發光或顯色法檢測等。
原創作者：上海恒遠生物技術發展有限公司
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