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ELISA實驗“顯色淡，靈敏度偏低”原因何在？

點擊次數：14797 發布時間：2015/10/10 8:50:26

在elisa試劑盒實驗中，常會遇到elisa試劑盒顯色淡靈敏度偏低的問題，ELISA實驗“顯色淡，靈敏度偏低”原因何在？以下是上海恒遠實驗室技術人員根據不同問題可能原因及其防止方法的整理：
可能原因及防止方法：
1．孵育反應時間不足
定時鐘準確定時
2．洗滌時沖擊力太大，洗滌液浸泡時間太長，洗滌次數增加
減少洗滌沖擊力，按說明書要求保留洗滌時間，準確記住洗滌次數
3．試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高
試劑盒置保溫箱內運輸，并放足夠數量的冰塊，盡量縮短運輸時間
4．顯色劑滴加量不足或順序顛倒，或混合后加入
滴加顯色液時，滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，反加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入
5．顯色劑反應時間不足
準確定時
6．蒸餾水水質有問題
測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響
7．樣品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反應
樣品不能加 NaN 3 防腐
8．試劑、樣品用前未能平衡
用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右。
9．試劑盒超過有效期
超過效期試劑盒不要使用
10．試劑開啟時間過長長菌
試劑開啟后請盡量在短時間內用完
11．恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃）
放入反應板時注意培養箱溫度，及時調整，孵育反應期間開啟不宜太多，影響溫度平衡。
12．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸頭內壁掛液太多或內壁不清潔
校正移液器，吸頭要配套，每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快，排放應完全。吸頭內壁要清潔，一次性使用。
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原創作者：上海恒遠生物技術發展有限公司