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技術文章

恒遠技術解說關于大鼠γ干擾素檢測樣本明確要求

點擊次數:15124   發布時間:2016/1/11 10:13:33

大鼠γ干擾素檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的大鼠γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ),再與HRP標記的γ干擾素(IFN-γ)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠γ干擾素(IFN-γ)濃度。

代測樣本要求注意事項:

1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

3. 樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。

4. 實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

5. 酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

6. 建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。

7. 牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

8. 本試劑盒定量范圍為75pg/ml-2400pg/ml,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(75pg/ml-2400pg/ml范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本*終濃度。

9. 若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。

10. 為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。

11. 試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。

12. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

原創作者:上海恒遠生物技術發展有限公司

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