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人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)ELISA試劑盒的實驗原理

點擊次數:14927   發布時間:2016/5/6 14:09:27

人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)elisa試劑盒實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)表達。用純化的
抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)的存在與否。
人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)ELISA試劑盒操作步驟:
1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(
空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸
及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重
復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15
分鐘.
10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色) 。
11.測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液
后15分鐘以內進行。
人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)ELISA試劑盒計算和結果判定 :
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUT OFF)計算:
臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)陰性陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人甲型流感病毒抗原(Flu A-Ag)陽性。

原創作者:上海恒遠生物技術發展有限公司

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