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技術(shù)文章

ELISA試驗(yàn)洗滌步驟注意事項(xiàng)-上海恒遠(yuǎn)

點(diǎn)擊次數(shù):14865   發(fā)布時間:2016/8/30 9:27:26

   
   洗滌在 ELISA 過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。
   ELSIA 就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié) 合的酶標(biāo)記物的目的。 通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性 地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等 塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的 干擾物質(zhì)洗滌下來?梢哉f在 ELISA 操作中,洗滌是*主要 的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按 要求洗滌,不得馬虎。 洗滌的方式除某些 ELISA 儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:

(1)浸泡式ELISA 洗滌:
a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
c.浸泡,即將洗 滌液注滿板孔,放置 1-2 分 鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙 上拍干;
e.重復(fù)操作 c 和 d,洗滌 3-4 次(或按說明規(guī)定)。
   在間接法中 如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。 微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是 疏水性的,非離子型洗滌 劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán) 和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。 洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫 20,其濃度可在 0.05%-0.2%之間,高于 0.2%時,可使包被在固相上的抗原或 抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。

(2)流水沖洗式ELISA 洗滌,流水沖洗法*初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗 ,持續(xù)沖洗 2 分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡 2 分鐘,吸干即可。
   浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為徹底,且也簡便、 快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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