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酶聯免疫試劑盒靈敏度對試驗結果的影響

點擊次數：14738 發布時間：2016/11/1 9:46:15

酶聯免疫試劑盒敏度高是一大利益，而這本來也是和查看樣本有些有關的，假設待測樣本中政策蛋白的濃度對比高，則對靈敏度懇求相對小一些。假設待測樣本中政策蛋白的濃度對比低，則有必要考慮靈敏度的疑問。
一般來說，試劑盒曲線上的*小濃度是對比精確的，低于這個值因為與曲線是個“S”型結構有關，所以結果是有過失的，是一種預算。再加上實驗過失，所以達不到志向的效果。建議挑選試劑盒時，應當看曲線上*小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
那么酶聯免疫試劑盒查看哪些規劃呢？確診試劑的查看規劃以ng/ml計。而多見的科研試劑盒中的樣本中的政策蛋白，規劃可隨樣本的類型而改變。所以實驗前應經過文獻和預實驗的辦法判定樣本是不是在所購的規劃內，是很首要的進程。
酶聯免疫試劑盒假設不在查看規劃內，分兩種情況對待：
A、假設樣本中政策蛋白太低，需找相應靈敏度更高的試劑盒來查看或濃縮樣本。
B、假設樣本中政策蛋白太高，則需求進一步稀釋后進行查看。
那么在ELISA法試驗中如何提高靈敏度呢?具體的操作方法如下：
1、包被液稀釋的抗原（4、8、16、32、64、128ng/ml），用移液器小心將抗原液100μl加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產生氣泡。每個濃度加4孔（4個復孔），對照孔4孔加入相同體積的包被液；其中兩孔加入100μl樣本。用保鮮膜包好酶標板，將酶標板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，放入4℃中包被過夜。
2、洗滌：將酶標板孔中的包被液傾干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，加入洗滌液洗滌進行洗滌。采用浸泡式洗滌法，將洗滌液注滿板孔，放置3min，間歇搖動，浸泡時間不隨意縮短，吸干孔內洗滌液，也可甩去洗滌液，反扣在吸水紙上拍干。重復洗滌4次。
3、封閉：在酶標板孔的底部加入封閉液200μl，室溫下封閉1h。
4、1h后將酶標板孔中的封閉液傾倒干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，然后每孔中加入一抗使用液100μl，注意將抗體液加在酶標板孔的底部，避免加在孔壁上部。用保鮮膜包好酶標板，將酶標板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置2h。
5、2h后取出酶標板，傾倒干凈酶標板孔中的一抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干。洗滌4次，洗滌方法同2。
6、在酶標板孔中加入梅標二抗1:4000倍稀釋的溶液100μl，加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產生氣泡。用保鮮膜包好酶標板，將其放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置1h。
7、取出酶標板，傾倒干凈孔中的二抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，按2洗滌方法洗滌4次。
8、在酶標板每孔中加入底物A液50μl，底物B液50μl，反應15min～20min后，在每孔中加入反應中止液50μl，在中止反應后15min時在酶標儀上于450nm處測定OD值。