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點擊次數:15265 發布時間:2016/12/27 9:17:39
elisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。操作中的各個環節都會影響試驗的檢測質量,而洗板也會影響到試驗的質量。
洗板可能碰到的問題有:
1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉;
2.采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導致洗板效果差;
3.反應板過多造成洗板等待時間長。
相應解決辦法有:
1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2.合理安排,或多用幾臺洗板機。
那么洗板的目的是什么?
在于將特異性結合于固相上的抗原(抗體)與溫育過程中吸附的非特異性成份分離,使免疫復合物與待測抗體(抗原)呈一定比例,洗板是否合格直接影響檢測結果的準確性。洗板應嚴格按照說明控制洗板時間及洗板次數,ELISA 檢測一般用洗滌液洗板3 次,洗滌液應嚴格按照操作說明進行稀釋, 洗液應注滿每個微孔并注意洗液不外溢,垂直甩板避免交叉污染,防止出現假陰性及假陽性結果。使用洗板機洗板可一定程度上避免環境污染、提高工作效率,洗滌開始時注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底并吸干孔內全部液體, 嚴格按照要求設置一定的洗板時間及洗板次數。洗板過程中注意沖力大小,避免沖力過大導致酶結合物丟失,吸光度值偏低。洗液應根據不同廠家的酶標板調整注水量, 注意不要溢出孔外; 稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中,使配出的洗液pH 在7.2~7.6 范圍內,用非金屬容器保存,保持液體新鮮無污染、沉淀。洗板結束后將板拍干,應垂直扣在備好的干凈的吸水紙或毛巾上,且注意每次更新干凈的吸水紙或毛巾。
洗板時應注意以下問題:
(1) 需每天校正注液量及殘液量, 洗滌后殘液量不得大于2μl;
(2)及時更換破損吸液針,避免破壞底板包被;
(3)針對不同廠家酶標板注意調整吸液頭下降高度, 避免沖洗針頭卡住酶標板;
(4)注意調整洗液量,洗液量過多將溢出,過少將達不到洗滌效果;
(5)關機前使用蒸餾水沖洗管道,避免洗液的結晶物堵塞管道;
(6)不同種試劑盒的洗液嚴禁混合使用。
原創作者:上海恒遠生物技術發展有限公司