對剛做ELISA實(shí)驗(yàn)的同學(xué)們都有一個困擾，做出來的數(shù)據(jù)該怎么分析？對數(shù)據(jù)處理一直不是很清楚，做出的結(jié)果誤差較大。那么，為什么ELISa實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差較大呢？今天上海恒遠(yuǎn)帶大家從以下幾個方面分析：
一、加 樣
1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；
3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
4.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
5.加樣后及時放入孵箱。
6.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
7.如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 8.標(biāo)本較多時，請分批操作。
二、孵 育
1.孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；
2.孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。
3.貼封片或加蓋；
4.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
三、洗 板
1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
4.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
5.合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
顯 色
6. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
7. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
8. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
9. 加樣時保持顯色劑不外流；
10.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
四、終 止
加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。
加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
五、讀 板
讀板時板底不清潔。
應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
六、全過程
1.整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;
2.實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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