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技術文章

人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）酶聯免疫分析

點擊次數：15558   發布時間：2012/3/9 9:12:57

人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）酶聯免疫分析

     本試劑盒僅供研究使用。

 藥品名稱：

通用名：人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）酶聯免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織或其它相關組織液中胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）含量。
實驗原理
本試劑盒應用夾心法測定標本中胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）水平。用純化的人胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）受體包被微孔板，往微孔中依次加入胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ），再與HRP標記的羊抗人受體結合，形成免疫復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中胰島素樣生長因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）抗原濃度。
試劑盒組成

1
20倍濃縮洗滌液
30ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品（240μg/L）
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

標本要求
1．標本采集后盡早進行實驗。
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3．可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
操作步驟
1.         標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在、第二孔中分別加標準品100μl，然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180μg/L，120μg/L ，60μg/L，30μg/L，15μg/L）。
2.         加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 
計算
  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．嚴格按照說明書操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
7．本試劑不同批號組分不得混用。底物請避光保存。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．如與英文說明書有異，以英文說明書為準
檢測范圍：
10μg/L -200μg/L
規格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
 
 

原創作者：上海恒遠生物技術發展有限公司

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