elisa試劑盒可用于測定抗原,也可用于測定抗體。該法適于測定細胞培養上清、血清、血漿及組織液中的樣本,攪擾小能夠測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。在這種測定辦法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體,②酶符號的抗原或抗體,③酶效果的底物。
ELISA試劑盒操作步驟
ELISA試劑盒運用前,將一切試劑充沛混勻。不要使液體發生很多的泡沫,防止加樣時參加很多的氣泡,發生加樣上的差錯。
依據待測樣品數量加上規范品的數量決議所需的板條數。每個規范品和空白孔主張做復孔。每個樣品依據自個的數量來定,能運用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后參加50ul于反響孔內。
參加稀釋好后的規范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內。當即參加50ul的生物素符號的抗體。蓋上膜板,悄悄振動混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數添加一次。
每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP,悄悄振動混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。ELISA試劑盒重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數添加一次。
每孔參加底物A、B各50ul,悄悄振動混勻,37℃溫育10分鐘。防止光照。
取出酶標板,敏捷參加50ul停止液,參加停止液后應當即測定成果。
在450nm波利益測定各孔的OD值。
依據ELISA試劑盒試劑的來歷和標本的性狀以及檢查的具備條件,可規劃出各種不同類型的檢查辦法。
(一)雙抗體夾心法
(二)雙位點一步法
(三)間接法測抗體
(四)競爭法
(五)捕獲法測IgM抗體
(六)使用親和素和生物素
ELISA試劑盒遍及用作非放射性同位素的成鍵化驗. 在這種辦法中, 一般規范配體是固定的, 經過參加溶液相受體或蛋白質來使之成鍵. ELISA試劑盒經過參加與受體特異性反響的抗體來定量成鍵的受體, 而且開始抗體的量以參加第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能識別抗體的結尾, 在其結尾的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發生反響, 從而使溶液顯色。
原創作者:上海恒遠生物技術發展有限公司