今天是11月的天，我公司開(kāi)展了一個(gè)ELISA總結(jié)討論會(huì)。今天將結(jié)果分享給大家，上海恒遠(yuǎn)生物福利來(lái)了！10月總結(jié)ELISA工作手冊(cè)公布：
·根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇和訂購(gòu)合適的elisa試劑盒。
·根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)合理的樣品實(shí)驗(yàn)排板，預(yù)留標(biāo)準(zhǔn)品，(+)和(-)對(duì)照，空白對(duì)照位置，樣品位置，所有對(duì)照樣品和待測(cè)樣品均需要實(shí)驗(yàn)復(fù)孔。
·實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)ELISA平臺(tái)穩(wěn)定，儀器設(shè)備正常工作，試劑耗材足夠?qū)嶒?yàn)需要。ELISA板包被實(shí)驗(yàn)操作流程
1.碳酸鹽包被緩沖液：50mM碳酸緩沖液，pH 9.6，4℃保存。稱取Na2CO3 0.15 克，NaHCO3 0.293克，蒸餾水溶解，定容至100 ml。
2.包被抗原：
·用50mM的碳酸鹽包被緩沖液(pH 9.6)溶解抗原，稀釋抗原濃度為10-20μg/ml，96孔酶標(biāo)板每孔加入100μl，4℃放置一個(gè)晚上。
·第二天棄去包被液后，PBST洗滌3次，直接后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者冰箱保存。
·包被細(xì)胞
① 在96孔培養(yǎng)板上接種細(xì)胞，2E4 cells/well，37℃放置一個(gè)晚上培養(yǎng)。
② 第二天用PBS洗滌培養(yǎng)板2-3次。
③ 每孔加入125μl 10% Formalin(1:10稀釋)，室溫下固定15 min。
④ 用滅菌水洗滌培養(yǎng)板3次，晾干后儲(chǔ)藏在2- 8℃?zhèn)溆谩?nbsp;
結(jié)果的判定
嚴(yán)格依據(jù)試劑盒提供的陽(yáng)性判定值(CO)進(jìn)行結(jié)果判定。廠商提供試劑的同時(shí)，說(shuō)明書(shū)上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)研究的基礎(chǔ)上，不應(yīng)隨意更改。定量測(cè)定需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。
室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(EQA)
EQA是一種回顧性評(píng)價(jià)，主要是控制實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的準(zhǔn)確性。其要點(diǎn)是保證同一患者的標(biāo)本一樣對(duì)待室間質(zhì)評(píng)物，必須強(qiáng)調(diào)的是EQA結(jié)果必須同IQC一并分析，找出原因，改進(jìn)工作中的不足，同時(shí)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室選擇合適的試劑盒。
綜上所有內(nèi)容，我公司技術(shù)人員說(shuō)：ELISA檢測(cè)操作步驟復(fù)雜，可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素較多，分布在測(cè)定操作的各個(gè)步驟中，因此必須加強(qiáng)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)結(jié)果。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司
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