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悄悄把培育細(xì)胞遺傳學(xué)的檢測(cè)技能告訴你哦

點(diǎn)擊次數(shù)：14767 發(fā)布時(shí)間：2019/6/27 9:31:20

細(xì)胞培育是體外研討細(xì)胞生物學(xué)性狀、遺傳學(xué)及分子生物學(xué)特性zui直接有效的手法。培育細(xì)胞遺傳學(xué)的主要檢測(cè)技能，包含性染色體的檢測(cè)、染色體閃現(xiàn)、染色體顯帶及染色體基因定位等。對(duì)培育細(xì)胞的分子生物學(xué)檢測(cè)主要包含細(xì)胞DNA檢測(cè)、RNA檢測(cè)及蛋白質(zhì)的檢測(cè)，而相關(guān)的生物學(xué)檢測(cè)主要包含細(xì)胞酶學(xué)檢測(cè)及細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。

組織培育細(xì)胞是研討細(xì)胞遺傳zui便利、zui有效的辦法和對(duì)象；也是揭示培育細(xì)胞性狀的重要方面。人二倍體細(xì)胞具有46條染色體數(shù)就是用細(xì)胞培育法所確認(rèn)出來的。當(dāng)前已發(fā)展出染色體分帶、姊妹染色單體分解染色、染色體原位雜交等多種技能。近年染色體熒光基因標(biāo)記法又取得迅速發(fā)展，使基因作為實(shí)體得以在染色體上閃現(xiàn)，從而填補(bǔ)了染色體和分子遺傳學(xué)之間的空白。染色體的研討已成為組織培育技能中重要組成部分。

一、性染色體檢測(cè)

(一)原理

在間期細(xì)胞核中，女人x染色質(zhì)和男性Y染色質(zhì)均可用特殊染色法閃現(xiàn)出來。女人的兩個(gè)x染色體中的一個(gè)，在間期時(shí)的染色質(zhì)呈異固縮(heteropycnosis)，呈深染的小體稱Barr氏體(圖9—1)。Barr氏體坐落問期細(xì)胞核內(nèi)面，呈三角形或半月形小體，易為碳酸復(fù)葒等染料著色。正常女人Barr氏體陽性，男性為陰性。男性Y染色質(zhì)坐落間期細(xì)胞核近中心部，易為鹽酸阿的平著色，熒光顯微鏡下調(diào)查發(fā)較強(qiáng)熒光，呈點(diǎn)狀小體，發(fā)光部分系Y姿色體異固縮的長(zhǎng)臂。初代培育細(xì)胞和二倍體細(xì)胞株均可調(diào)查到性染色質(zhì)，傳代細(xì)胞系表現(xiàn)不規(guī)律。

(二)辦法

1.碳酸復(fù)紅(basic fuchsin)閃現(xiàn)x染色質(zhì)法

(1)資料：蓋玻片培育的細(xì)胞。

(2)染色液

儲(chǔ)存液：稱堿性復(fù)紅3g，溶于1OOml 70％乙醇中，可長(zhǎng)時(shí)間保存。

(3)染色過程

1)細(xì)胞：蓋玻片培育細(xì)胞用37℃的BSS漂洗后，立即投入染色液內(nèi)染色5～lOmin(亦可先固定再染色)；如用涂片標(biāo)本則應(yīng)待涂片干后，迅速投入96％酒精固定10～15min后再染色。

2)分解：用96％酒精分解lmin，分解時(shí)要不斷搖擺，把片子上多余的染料漂洗掉。

3)脫水：通過純酒精lmin。

4)封片：二甲苯透明2~3min，樹膠封固。

(4)成果：細(xì)胞質(zhì)不著色，細(xì)胞核染成紫紅色；陽性Barr氏體附于細(xì)胞核膜內(nèi)面呈三角或半月形小體。

2．熒光染色顯不Y染色質(zhì)法

(1)資料：蓋玻片培育的細(xì)胞。

(2)染色液

(3)染色過程：Y染色質(zhì)閃現(xiàn)染色與染色體熒光顯帶法相同。

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原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司