上海恒遠秉承“信譽、質量、品牌、誠信為本"的理念，以優(yōu)良的服務質量和實惠的價格，elisa試劑盒實驗前，請仔細閱讀中英文說明書，我們提供免費代測，實驗過程指導服務。在做ELISA實驗的時候加入顯色底物后，標準品有顏色，但結果分析發(fā)現標準品點吸光值偏低或偏高、標準曲線無梯度等等，總結如下原因：

一、標準曲線點吸光值偏高，超出儀器檢測范圍

ELISA標準曲線點的吸光值一般在3.0以下，若太高超出儀器檢測范圍，顯示OVER FLOW，可能原因：

1.可能原因：如OD絕對值靠譜，則顯色過度

1.解決方法：TMB顯色體系中建議根據S1，S2顏色進行判斷，當S1，S2深藍色，有明顯梯度，S5有淡藍色時即可終止。

2.可能原因：僅作單波長檢測

2.解決方法：由于參考波長讀取非特異性檢測，如指紋、劃痕、水漬等，對結果也有影響。建議*終結果以雙波長為*準確。

二、標準曲線點吸光值偏低

ELISA標準曲線點的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：

1.可能原因：粉末標準品未充分溶解

1.解決方法：粉末標準品按說明書加一定體積的液體后，輕柔混勻，室溫靜置30分鐘，充分溶解。

2.可能原因：標準品反復凍融

2.解決方法：標準品反復凍融后活性降低。

3.可能原因：孵育溫度、時間

3.解決方法：按說明書要求孵育條件進行孵育。

4.可能原因：顯色時間控制

4.解決方法：TMB顯色體系中建議根據S1，S2顏色進行判斷，當S1，S2深藍色，有明顯梯度，S5有淡藍色時即可終止。

三、標準曲線無梯度

ELISA 實驗中標準品2倍倍比稀釋，但結果分析標準曲線沒有梯度，可能的原因：

1.可能原因：樣品或標準品污染

1.解決方法：避免污染

2.可能原因：錯誤的樣品或標準品的稀釋

2.解決方法：完全按照說明書稀釋

3.可能原因：偶聯(lián)抗體濃度過高

3.解決方法：按照說明書調整到*佳的濃度

4.可能原因：TMB底物孵育時間過長

4.解決方法：調整到合適的孵育時間

5.可能原因：錯誤的孵育時間或溫度

5.解決方法：完全按照說明書

6.可能原因：孵育時未加蓋導致溶液揮發(fā)和污染

6.解決方法：貼封片或加蓋

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