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ELISA常見樣本的處理方法—細胞樣本

點擊次數(shù)：14727 發(fā)布時間：2021/3/17 11:03:17

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）是種快速、靈敏、準確可靠的種定量分析方法，樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。利用ELISA進行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結(jié)果。下面就常見ELISA細胞處理方法的整理，希望對您有所幫助。

細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。需要注意的是：因該類樣本干擾因素較多，如細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量(大于 10^6)、ph(約為 7)、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

如果目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本，如果目的物主要存在于胞內(nèi)，則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單，取細胞培養(yǎng)上清，1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。

細胞裂解液：

1）貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集）；

2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3次；

3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復凍融）：

⇒ 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂；

⇒ 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 度以下冰凍，室溫融解，反復3次，使細胞溶脹破碎；

4）將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

般情況下，物理方法如反復凍融，勻漿等方法會比化學方法好，因為化學方法會引入酸或堿，可能會對ELISA實驗產(chǎn)生影響。我們也做了相關實驗來評測化學提取液和洗滌劑對ELISA檢測的影響，如 RIPA、TritonX-100、NP-40和SDS、脫氧膽酸鈉、β巰基乙醇、DTT 和尿素。根據(jù)我們的質(zhì)檢結(jié)果，高濃度的洗滌劑會影響ELISA檢測的終結(jié)果。然而，其效果會洗滌劑濃度的降低而減少。與其他化學裂解緩沖液相比，1％的 Triton X-100 和 1％NP-40 對 ELISA檢測的影響較小。如果定要用化學提取方法的話，推薦用這兩種洗滌劑來提取靶蛋白。利用化學的細胞裂解液裂解細胞，如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應影響檢測效果，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應小于 1 周，-20 度不應超過 1 個月，-80度不應超過2個月。在標本使用應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功yi 步, ，以上就是關于常見樣本處理方法的個簡述，供研究者參考。