使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定樣本中二核苷酸（CpG）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中二核苷酸（CpG）水平。用純化的二核苷酸（CpG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入二核苷酸（CpG），和HRP標(biāo)記的二核苷酸（CpG）抗原，使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的二核苷酸（CpG）的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中二核苷酸（CpG）的含量。  

試劑盒組成

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本處理：（1）水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過(guò)濾后，備查

（2）組織   樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

8. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

檢測(cè)范圍：

50ng/L -2800ng/L

規(guī)格：

96份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司