Elisa試劑盒的檢測范圍以ng/ml計。而常見的科研試劑盒中的樣本中的目標蛋白,范圍可隨樣本的類型而變化。所以實驗應通過文獻和預實驗的方法確定樣本是否在所購的范圍內,是很重要的步驟。
Elisa試劑盒常見的樣本處理方法:
血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4 度過夜,然后1000×g 離心20分鐘,取上清即可。這是一個讓血液自然凝固的過程,溫度越低,凝集越緩慢,可根據需要添加促凝劑。
血漿:血漿樣本需要抗凝,一般建議用2.0%EDTA,1%肝素,3.8%C6H5Na3O7作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2~8度1000g離心15分鐘,取上清即可檢測。根據待檢測目標物的性質不同選取不同的抗凝劑。
C6H5Na3O7(檸檬酸鈉):Ca2+有凝血作用,能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物,從而阻止血液凝固。配成 109mmol/L的濃度和血液1:9, 106mmol/L的濃度和血液1:4
缺點:血液中溶解度低,抗凝作用較弱。
優點:對凝血因子有很好的保護作用,大部分凝血試驗都可用C6H5Na3O7抗凝。
二胺四乙酸(EDTA)鹽:與血液中的鈣離子結合形成配位化合物, 從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10
優點:對紅細胞和白細胞形態影響小。
缺點:影響血小板的聚集。不適用于凝血實驗和血小板功能相關實驗的檢測。
肝素:通過與抗凝血酶Ⅲ結合,增強抗凝血酶的作用,滅活絲氨酸蛋白酶,從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L 與血液 1:10
優點:抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。
缺點:引起白細胞聚集。肝素抗凝血應于短時間內使用,否則放置過久血 液又可凝固。
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