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閱讀次數(shù):1021 發(fā)布時間:2015/4/13 10:17:43
4月10日上午我司王總接到上海滬鼎公司錢經(jīng)理的來電,錢經(jīng)理說4月11日—12日公司將舉辦elisa試劑盒交流會,希望我司王總能出席本次會議,*終我司王總答應參加這次會議。
此次的會議內容主要講的是ELISA試劑盒實驗過程中操作步驟會遇到哪些問題?
下面是上海滬鼎公司這次會議的內容:
ELISA試劑盒操作方法一:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
ELISA試劑盒操作方法二:用于檢測未知抗體的間接法:
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
2.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3.于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,*后一遍用DDW洗滌。
4.于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘
5.于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6.可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
ELISA 是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點,已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域。
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