5.18重慶市中山醫(yī)院劉老師在我司訂購了人細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）elisa試劑盒、人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A（SP-A）ELISA試劑盒，有的客戶在訂購ELISA試劑盒的時候都會問到關(guān)系ELISA試劑盒的一些問題，ELISA試劑盒主要的問題有哪些呢？

在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，加底物后多長時間終止反應(yīng)測定結(jié)果呢?讓我司錢經(jīng)理為您講解，一般可采取以下這兩種方法：

　　、任意確定一個時間，如20分鐘或30分鐘終止反應(yīng)，測定被檢標(biāo)本和陽性參考標(biāo)本的O.D值。

　　第二、制備好一批酶結(jié)合物后預(yù)試時間，在反應(yīng)溫度固定時，當(dāng)陽性參考血清O.D值達(dá)到1.0時終止反應(yīng)，記錄這個時間，如30分鐘，以后用本批酶結(jié)合物測定待檢樣品時都采用同一時間終止反應(yīng)，這個辦法不需要校正，比較方便。

　　國外在使用自動測定儀時，加底物后隨時測定，每塊試驗(yàn)板上陽性參考血清的O.D值，當(dāng)其達(dá)到1.0時，立即將全板上被試標(biāo)本終止反應(yīng)進(jìn)行測定，這樣所得結(jié)果比較一致。我國也有自動酶標(biāo)測定儀，但由于固相載體不夠均勻，也很難用板來直接測定。

　　在ELISA中所加酶結(jié)合物之濃度，加后孵育時間以及加底物后孵育時間。這三個因素也是互相有影響的。一般講，酶結(jié)合物濃度低，則要求孵育時間長些，而酶結(jié)合物濃度高則要求孵育時間短些，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況，變更不同因素，以取得良好的結(jié)果。

由于ELISA中變異因素多，對于要診斷某一疾病時，必須進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)室預(yù)試，摸索，或叫實(shí)驗(yàn)研究，在酶結(jié)合物已經(jīng)確定的情況下，一般要求預(yù)測以下5個條件：

　　1.抗原包被濃度;

　　2.被檢血清稀釋度，即測劑量反應(yīng)曲線;

　　3.抗體作用時間;

　　4.酶結(jié)合物作用時間;

　　5.底物作用時間。

　　一旦試驗(yàn)條件摸清，以后在正式測定時，必須固定條件，不要隨時改變，以使試驗(yàn)系統(tǒng)保持足夠的穩(wěn)定性。